基因扩增仪。 用于科研及临床的基因扩增 定性PCR基因扩增 荧光/酶免终点定量DNA基因扩增 基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增 适合国内外各种PCR试剂盒传染病类(各型肝炎病毒、结核杆菌、STD性传播疾病、优生优育、支原体、衣原体、寄生虫等)、肿瘤类(P53、幽门螺杆菌等)、科研类(遗传鉴定、细菌病毒分型等)
方法:
1、将DNA加热(至90~95℃)变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板。
2、则是令 Primers于一定的温度下(冷却至55~60℃)附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加热至70~75℃)进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。
标准PCR仪也叫做终点PCR仪,是指目的基因仅经过预变性、变性、退火、延伸阶段产生大量的核酸序列的PCR仪,PE-Cetus公司推出的世界上第一台PCR自动化热循环仪属于此种。
根据PCR退火温度和扩增条件(细胞内/外),标准PCR又可以分为三类:普通PCR、梯度PCR和原位PCR。
PCR是分子生物学研究极其重要的工具,是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制,即人为创造核酸半保留复制条件,使目的DNA在细胞外完成扩增的过程,它可被看作是生物体外的特殊DNA复制。
扩展资料
1、普通PCR仪:一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。主要是用作简单的、对单一退火温度的目的基因的扩增。主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。
2、梯度PCR仪:普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。梯度PCR仪每个孔的温度可以在指定范围内按照梯度设置,一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)。由于被扩增的DNA片段不同,其最佳退火温度也不同,通过梯度设置。
可一次性筛选出最佳的退火温度。这样既可节省试验时间,提高实验效率,又能节约实验成本。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。梯度PCR仪多应用于科研、教学机构。
3、原位PCR仪:是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来,用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪,从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技术的待检标本一般先经化学固定,以保持组织细胞的良好形态结构。
细胞膜和核膜均具有一定的通透性,当进行PCR扩增时,各种成分,如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可进进细胞内或细胞核内,以固定在细胞内或细胞核内的RNA或DNA为模板,于原位进行扩增。
原位PCR仪对于在分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有着重要意义。
参考资料来源:百度百科-PCR仪
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
用于科研及临床的基因扩增,定性PCR基因扩增,荧光/酶免终点定量DNA基因扩增,基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增适合国内外各种PCR试剂盒传染病类(各型肝炎病毒、结核杆菌、STD性传播疾病、优生优育、支原体、衣原体、寄生虫等)、肿瘤类(P53、幽门螺杆菌等)、科研类(遗传鉴定、细菌病毒分型等)。
技术原理:标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得CT值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
PCR基因扩增仪按照变温方式通常有以下三类以及特点:
(1)水浴式PCR仪:变温快、时间准、温度均一,但体积大,自动化程度不高。
(2)变温金属块式PCR仪:通过半导体加热和冷却,并由微机控制恒温和冷热处理过程。装置比较牢固耐用,温度变换平稳,有利于保持Taq DNA聚合酶的活性。
(3)变温气流式PCR仪:以空气作为热传播媒介,由大功率风扇及制冷设备提供外部冷空气而制冷。成本较低;安全程度高。微机配上软件,可灵活编程。
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