液相色谱仪是一款以用户为核心的智能化的色谱仪,具有常规HPLC的基本性能,并扩展了更多智能化的功能,能很好的满足用户的各类不同的应用要求,使用户能更加轻松的使用,并获得准确的分析数据。
一、原理:
高效液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谐的理论,色谱柱则是用特殊的方式用小颗粒装填而成,造成的结果就是色谱柱的柱效远远高于原始的经典液相色谐,它柱子使用后还能具有高度灵敏度检测器。能够对流出来的分析物进行连续检测。
色谱仪是利用混合物各组分在固定相和流动相中溶解、分配或吸附等化学作用性能的差异,使各组分在作相对运动的两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。高效色谱仪在食品分析、环境分析、生命科学、医学检验和无机分析等领域得到广泛使用。-般来说,80%~85%的有机物原则上可采用高效液相色诸仪分析。
高效液相色谱仪操作流程为开机、超声、排气、走基线。
1、开机前先将流动相过滤和超声:水流动相用混合滤膜(0.2μm)过滤,有机流动相用有机滤膜过滤,之后超声脱气15-20分钟。(过滤的目的是除去流动相里的杂质,以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱;超声的目的是排除流动相里面的气体,以防气体进入色谱柱损害色谱柱,影响柱效能)
注意:试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜,第一次使用时感觉效果不好,于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2、超声结束后,将流动相放置到规定位置(1号泵接水流动相,2号泵接有机流动相),开机逐个排气(先启动泵,排气结束后再打开检测器)。
3、排气结束后,关闭所有排气阀。先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟,基线走稳之后,再打开水流动相(注意:水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min),继续走基线,直到基线平稳。
注意:实验结束后,再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟,冲出色谱柱内残留的样品物质,预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内,导致下次使用难以冲出,色谱柱柱压偏高,基线不稳,出现大量鬼峰。
4、走基线时,应将进样阀处于Load状态,用注射器进样时应快速进样,进样后将进样阀立即扳回到Inject状态,此时液相系统开始进入采样状态。采样结束后,可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑,也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。
数据分析:
色谱得到的原始数据为色谱图,我们需要对途中的色谱峰进行积分,获得峰面积,并根据实验需要,使用不同的方法进行定量计算,比如外标法,内标法,面积百分比法等。
仪器还可以得到光谱或者质谱信息,我们可以通过色谱柱数据软件的对应功能得到光谱图及质谱图,获得定性信息。
获得所需信息后,可以利用色谱软件将结果输出成不同格式的报告,或将处理好的结果导入其他软件(如统计分析)进行二次处理。
高效液相和超高效液相的区别主要是柱压。
超高效液相柱压上限是高效液相的两倍多。大家知道,色谱柱填料粒径越小,理论塔板数就越高,也就是说柱效越高,所以之前色谱柱发展过程中是追求越来越低的填料粒径的,但是高效液相能够承受的最大柱压只有400bar所以低于3um的柱子一般是要降低流速来降低柱压才能够使用的,但是这样却会降低分离的效率,所以超高效液相色谱应运而生,超高的耐压,可以承受最高1000bar的压力,即便是小粒径色谱柱也可以采取正常的流速来使用,这就大大缩短了分析的效率。
不过超高效液相色谱仪目前还不算特别普及,毕竟大部分实验室用的还是普通的高效液相色谱仪,一个缺点就是高效液相色谱仪的方法没有办法转移到普通高效液相色谱仪使用,所以虽然有其优势,平时方法开发时仍不是首选,另一方面,小粒径色谱柱价格比较昂贵,这就造成使用成本比较高,一般的实验室也负担不起。当然还要澄清一点,色谱柱粒径不是越小越好,也是有一个极限的,超过那个极限,即便继续缩小粒径效果也不会好很多。
uhplc是超高效液相色谱仪的简称,其英文全称为ultra
high
performance
liquid
chromatography。
超高效液相色谱是分离科学中的一个全新类别,uplc借助于hplc(高效液相色法)的理论及原理,涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域,作为世界第一个商品化uplc产品的waters
acquity
uplctm
超高效液相色谱系统在1996年问世,之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前,超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。
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