高压匀浆器是常用的设备,它由可产生高压的正向排代泵(positivedisplacenemtpump)和排出阀(dischargevalve)组成,排出阀具有狭窄的小孔,其大小可以调节.细胞浆液通过止逆阀进入泵体内,在高压下迫使其在排出阀的小孔中高速冲出,并射向撞击环上,由于突然减压和高速冲击,使细胞受到高的液相剪切力而破碎.在操作方式上,可以采用单次通过匀浆器或多次循环通过等方式,也可连续操作.为了控制温度的升高,可在进口处用干冰调节温度,使出口温度调节在20℃左右.在工业规模的细胞破碎中,对于酵母等难破碎的及浓度高或处于生长静止期的细胞,常采用多次循环的操作方法.
匀浆装柱可以提高柱效。
匀浆,均匀化的物质;物料在容器中通过电机旋转驱动旋刀或研磨器研磨,同时进行劈裂、碾碎、掺合等过程,使物料搅拌捣碎尤指成份分得很细,并经过充分混匀的生物组织。
匀浆机就是把动植物组织打散并研磨成均匀的糊状物的机器,匀浆机广泛用于动物组织、生物样品、食品、药品、化妆品、农产品、固体、半固体、非水溶性样品的匀浆处理,可匀浆20ml~250ml。
特别适合于微生物检测样本的制备,使从上述样品中提取细菌的过程变得非常简单、快速,只需将样品和稀释液(或乳化剂)加入到灭过菌的杯子中,然后将杯子按到匀浆仪上,开机定时即可。
柱效(column efficiency),是指色谱柱保留某一化合物而不使其扩散的能力。柱效能是一支色谱柱得到窄谱带和改善分离的相对能力。
柱效,从名字上理解是色谱柱的分离效果。色谱柱的有效塔板数越大或有效的塔板高度越低,色谱柱的柱效越好,类似于每个塔板的分离效率相同,有效塔板数越多,最终得到的物质越纯。
柱效率基本信息
柱效率是指溶质通过色谱柱之后其区域宽度增加了多少,它与溶质在两相中的扩散及传质情况有关,这是所谓色谱的动力学过程。
入职以来遇到的尚未攻克的难题之一是磷酸化的抗体在组织样品里一直跑不出阳性信号。
最开始考虑可能是抗体比例问题,便由说明书建议的1:1000的稀释比例逐步增加到了1:50,始终只有杂带。联系厂家的技术人员,建议排除一下是不是是在组织中的表达太低所以看不到阳性信号,因此一方面根据厂家提供的protocol优化实验流程,另一方面液单独培养了一波细胞进行取样。事实证明,真的是组织样本的问题。
由于磷酸化的蛋白比较容易降解,因此首先考虑是否是在组织样本制作的过程中存在导致其降解的因素。将细胞样品的制备过程与之进行对比,可以优化的最可能的点是匀浆这一步。
组内讨论之后决定拿纯手工的玻璃研磨器同平时常用的电动匀浆仪进行一下比较。以排除电动匀浆仪匀浆过程中的产热问题对样品的影响。
根据师姐既往的经验,预先配制每个样品500ul RIPA混合物 (RIPA裂解液+1000X PMFS+100xPI+100X磷酸酶抑制剂)。先加入组织研磨后,加入200ul RIPA混合物,沿着玻璃柱加入,最后用200ul清洗一遍玻璃柱,避免产生过多气泡;另一方面用作对比的电动匀浆仪组每个样品准备200ul RIPA混合物。
开始操作的时候,本想着加了液体以后再研磨一下会比还没加RIPA混合液的效果更好,顺带还能清洗下管壁,可结果是,由于研磨管内空间很小,液体是进去了,到研磨过程中空气也跑了进去,导致整个管子里全都充满了气泡。直到此时才理解了师姐protocol里暗藏的玄机。
整个步骤听上去挺简单,而真正动手操作的时候,就变成脑子听懂了手却跟不上,还雄心勃勃想对步骤进行改良。避免产生过多气泡,真的应该避免。果然,不听老人言,吃亏在眼前。
科研欢乐的实验生活还在继续,要加油,争取早日攻关成功~
不是一同一个东西
均质机
是通过柱塞的往复运动产生的高压,均质机用来做
细胞破碎
,分散乳化
匀浆机
就是把动植物组织打散并研磨成均匀的糊状物的机器
自己再找
度娘
解释一下名词吧
我说的太详细有点像做广告的嫌疑
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