方法:
1、将DNA加热(至90~95℃)变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板。
2、则是令 Primers于一定的温度下(冷却至55~60℃)附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加热至70~75℃)进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。
标准PCR仪也叫做终点PCR仪,是指目的基因仅经过预变性、变性、退火、延伸阶段产生大量的核酸序列的PCR仪,PE-Cetus公司推出的世界上第一台PCR自动化热循环仪属于此种。
根据PCR退火温度和扩增条件(细胞内/外),标准PCR又可以分为三类:普通PCR、梯度PCR和原位PCR。
PCR是分子生物学研究极其重要的工具,是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制,即人为创造核酸半保留复制条件,使目的DNA在细胞外完成扩增的过程,它可被看作是生物体外的特殊DNA复制。
扩展资料
1、普通PCR仪:一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。主要是用作简单的、对单一退火温度的目的基因的扩增。主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。
2、梯度PCR仪:普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。梯度PCR仪每个孔的温度可以在指定范围内按照梯度设置,一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)。由于被扩增的DNA片段不同,其最佳退火温度也不同,通过梯度设置。
可一次性筛选出最佳的退火温度。这样既可节省试验时间,提高实验效率,又能节约实验成本。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。梯度PCR仪多应用于科研、教学机构。
3、原位PCR仪:是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来,用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪,从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技术的待检标本一般先经化学固定,以保持组织细胞的良好形态结构。
细胞膜和核膜均具有一定的通透性,当进行PCR扩增时,各种成分,如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可进进细胞内或细胞核内,以固定在细胞内或细胞核内的RNA或DNA为模板,于原位进行扩增。
原位PCR仪对于在分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有着重要意义。
参考资料来源:百度百科-PCR仪
我推荐西安天隆自己研发的PCR仪。有基本型、梯度型、实时荧光定量等多种型号。最重要的是天隆已经在该领域有十多年的经验,是最早研发生产PCR仪的公司之一。
西安天隆生产民族品牌PCR仪已有十年历史,是国内唯一具有定性、终点定量、实时定量PCR仪三个医疗器械注册证和CE认证的民族品牌。其生产的PCR仪在国产同类产品中累计销量第一。也是国家强制性行业标准2006年实施以来首家通过检测并获得SFDA注册证的国产实时PCR仪。实时PCR仪国家发明专利(ZL2004.1.0073432.1)已获授权,产品已获省部级科技成果二等奖及国家重点新产品证书,以PCR为代表的实验室设备已出口韩国、巴基斯坦、沙特等多个国家。
03年以来,西安天隆利用其自身的研发实力与西安交通大学、浙江大学、德国威廉港大学、中科院电子所等产学研协作,相继承担了西安市、陕西省重大技术创新及国家中小企业创新基金等多项科研项目,如“公共场所特定病毒(如SARS)快速采样及定量分析评估系统”;“柔性照明低误差芯片阅读仪”(国科发计字[2004]460号);“用于疾病分子诊断的实时荧光定量PCR核酸检测仪及配套试剂的产业化(2007ZKC06-05)”等。公司已成为西安市高技术产业化示范工程和西安市生命科学仪器工程实验室。2007年底又传来喜讯,西安天隆科技有限公司牵头承担的重大疾病PCR分子诊断仪国家重点研究项目已获国家批复,以上充分证明了西安天隆在我国生物医学仪器研发及产业化中的主导地位。
PS:进口的仪器是很贵,现在国内的水平也不错,都是经过反复验证的。我们要相信国产的东西会越来越好滴~
PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。
常见的PCR仪有四种类型,分别是普通基础PCR仪,梯度PCR仪,实时荧光定量PCR仪和原位PCR仪。可百度康高特,有详细资料参考。
进口的有:ABI的,BIO-RAD的iQ5\x0d\x0aAppliedBiosystems公司的7700型实时荧光定量PCR仪是全球公认的荧光定量PCR的金标准\x0d\x0aBIONEER:国内的用户可能听说过这个品牌的不多,只有早期较多使用进口引物的实验室和研究所或留美学者知道这个品牌。Bioneer最初是以高通量的引物合成起家,引物合成在国际上有很高的知名度。后经10几年发展产品线已覆盖整个分子生物学领域,目前同takara的产品线几乎完全一样。BIONEER的普通梯度PCR仪的价格同其他进口设备的价位比较,很具有杀伤力。这家公司也于2006年底推出了荧光定量PCR仪ExicyclerTM96,产品技术参数也是采用96孔Peltier半导体加热,5通道,16bitCCD检测,也带有梯度功能。这款产品的参数几乎与Bio-rad的IQ5一模一样,而且检测的CCD像素还要高于IQ5,理论上检测灵敏度应该更好一些。产品价格据说还要比Bio-rad更低一些,号称是性价比最高的荧光定量PCR仪。但是缺点是现在国内用户很少,了解起来不太容易。有兴趣的客户可以联系北京力途科技有限公司进行试用,新公司都注重是售后服务,大家毕竟要亲身体会到才是最可靠的。\x0d\x0aStratagene:Stratagene现在为安捷伦公司的子公司,也是专著于分子生物学研究产品开发的公司。在国内它的试剂产品卖的不多,处于推广阶段。Stratagene的荧光定量PCR产品Mx3005P同以上两种产品技术参数也差不多96孔Peltier半导体加热,5通道,PMT检测器,但是没有梯度功能,用户不能在这台仪器上优化反应条件。另外有客户反应该仪器做工较粗糙,噪音比较大,而且边缘的孔做实验的效果不太好,但是只要使用热模块中间的孔做实验效果还是不错的。这样的问题问题在ABI7500仪器上也同样存在,但是Stratagene的价格要实惠很多。\x0d\x0a\x0d\x0a国产的:\x0d\x0a西安天隆科技有限公司的TL988型实时荧光定量PCR仪\x0d\x0a杭州博日的FQD-48A
1、仪器性能:进口PCR以,和国产的PCR仪,在技术和使用性能上基本上没有多大的差别,比如:升降温速率,孔间温差,温度均一性,梯度温度范围,热盖温度等性能指标,国内外仪器基本达到了相同水平。而其差别主要是在功能上的差别,价格确实相差几倍。
2、仪器功能:进口和国产仪器主要功能:如保存,过温保护,断电保护,热盖功能等基本上是一样的,只是附带功能上有所差别,比如:进口的显示屏是大型的触摸式荧屏操作,国产的大多是触摸键,荧屏显示操作,进口仪器有的可以升级为荧光定量PCR仪,而国产的目前主要是专用机。而这些仪器附带功能的差别大多都是最近两年新推出来的,价格确是相差几倍。有的进口仪器没有这些附带的特殊功能,从性能和功能上比有的等于或低于国产的。
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